詞條
詞條說(shuō)明
在*沉淀試驗(yàn)后的WB驗(yàn)證環(huán)節(jié)中,二抗的選擇往往可以避免經(jīng)常出現(xiàn)的重鏈輕鏈的干擾原因,當(dāng)使用常規(guī)的Anti-lgG(H+L)酶標(biāo)二抗時(shí),通常會(huì)出現(xiàn)對(duì)應(yīng)*沉淀一看的重鏈(55kDa)和輕鏈(30kDa)的兩條帶。如果檢測(cè)的目的蛋白分子量在55kDa或者30kDa附近時(shí),就會(huì)收到這兩條帶的干擾。針對(duì)這種情況,艾美捷推薦兩種二抗解決方案: 一種是在IP和WB實(shí)驗(yàn)中使用相同的抗體,可以通過(guò)蛋白質(zhì)分子量
GST標(biāo)簽系統(tǒng)具有蛋白表達(dá)產(chǎn)率高、表達(dá)產(chǎn)物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細(xì)菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過(guò)親和層析得到,也可以直接被位點(diǎn)特異性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的優(yōu)點(diǎn),商品化的GST融合蛋白表達(dá)體系以及GST標(biāo)簽抗體系統(tǒng)至GST抗體推薦—原裝進(jìn)口GST標(biāo)簽抗體的選擇今仍被廣泛應(yīng)用。用GST融合表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)外源基因時(shí),需要對(duì)融合表達(dá)的產(chǎn)
在*沉淀(Immunoprecipitation, IP)和*共沉淀(co-Immunoprecipitation, co-IP) 實(shí)驗(yàn)中,IP和WB的操作過(guò)程中通常會(huì)用到相同的一抗或同種屬來(lái)源的一抗,這種情況下,如果使用常規(guī)的Anti-IgG(H+L)酶標(biāo)二抗,WB實(shí)驗(yàn)中IP抗體變性后產(chǎn)生的重鏈(55kDa)和輕鏈(25kDa)都能夠識(shí)別,而此非特異的信號(hào)往往會(huì)部分甚至完全掩蓋目的蛋白的信
His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于重組蛋白質(zhì)的吸附純化。由于分子量較小,并且較*分離和純化,His-tag 融合標(biāo)簽與其他標(biāo)簽相比有很多明顯優(yōu)勢(shì), 是目前用于純化的融合標(biāo)簽中使用較為廣泛的一種。His抗體可以用于檢測(cè)和His標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位,以及純化、定性或定量檢測(cè)His融合表達(dá)蛋白等。然而,目前商品化His 蛋白
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